细胞培养室搬迁，如何保障全程无菌环境，避免细胞株污染或活性降低

细胞培养室搬迁 无菌 + 细胞活性保障精简要点

核心：分阶无菌管控、恒温稳运、新室预标、全程无暴露，全流程阻断污染，减少细胞应激损伤。

一、搬迁前：双室筹备，细胞预处理

新室：完成洁净 / 温湿度 / 压差调试并连续运行 72h，臭氧 + 酒精消毒，空白培养基验证无菌；提前校准培养箱、超净台等设备，接通无菌水 / CO₂并调试。

旧室：细胞选对数生长期处理，贴壁 / 悬浮细胞均制高浓度悬液，加冻存液梯度冻存（珍贵株留旧室液氮备份）；无菌耗材双层密封、非无菌设备外表面消毒，液氮罐补满液。

二、搬迁中：全程无菌转运，精准控温

细胞转运：冻存细胞用 - 80℃干冰 / 程控低温箱，活细胞（仅短途）用 37℃恒温箱，全程密封、防震荡，不随意开盖；

设备 / 耗材：无菌与非无菌分开运，所有物品进新室前，在缓冲间做 75% 酒精表面消毒，拆外层包装后移入；

人员动线：专业人员穿无菌连体服，走旧室无菌口→专用通道→新室无菌口单向动线，不交叉、不折返。

三、搬迁后：新室复校，无菌复苏复培

设备归位：外表面二次消毒，超净台紫外 + 送风、培养箱校准 CO₂/ 温湿度后，均用空白培养基验证无菌；无菌耗材移入超净台，冷藏试剂立即归位；

细胞复苏：冻存管 37℃水浴 1-2min 快速融解，超净台内稀释 DMSO、离心重悬后接种，24h 观察、48h 换液；活细胞立即入培养箱静置 2-4h，换新鲜培养基复培；

环境监控：连续 7 天监测新室沉降菌 / 浮游菌，每日记录设备参数，超净台 / 培养箱定期无菌检测。

四、核心防护细节

不同细胞株分开冻存、转运、复苏，标注清晰不混用，杜绝交叉污染；

细胞全程避温度骤变，冻存≥-80℃、活细胞 37℃±1℃，复苏融解必须快速；

所有操作均在超净台完成，耗材 / 培养基确保无菌，设备全程精准标定；

新室执行严格无菌管理，非培养人员禁止入内，定期臭氧消毒。

五、简易应急

温度异常：冻存细胞回升至 - 60℃以上就近入液氮，活细胞偏离温度超 2h 立即换液加保护剂；

密封破损：重新消毒封装，废弃疑似污染耗材；

活性偏低：换新鲜培养基，适当调整 CO₂浓度，加生长因子；

杂菌污染：立即隔离污染细胞，消毒相关设备，更换所有耗材 / 培养基。

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