干细胞基因治疗实验室不同功能区的洁净等级如何匹配

干细胞基因治疗实验室不同功能区洁净等级匹配原则

适用区域：细胞无菌接种、基因编辑（如 CRISPR）、制剂灌装、冻存前分装工位。

洁净等级要求：操作台面为局部 A 级（ISO 4 级），采用垂直单向流罩 / 隔离器，风速 0.3~0.5m/s，悬浮粒子≤35 粒 /m³（≥0.5μm）；周边环境为B 级背景（ISO 5 级），乱流净化，换气次数≥50 次 /h。

匹配逻辑：保障细胞与载体的无菌状态，避免微生物污染导致实验失败；局部 A 级替代全室 A 级，节省空间与成本。

2、细胞培养扩增区：B 级

适用区域：干细胞扩增、病毒载体包装、细胞诱导分化间。

洁净等级要求：B 级（ISO 5 级），维持正压环境，相对相邻低洁净区压差≥5Pa，悬浮粒子≤352 粒 /m³（≥0.5μm），沉降菌≤1cfu / 皿・4h。

匹配逻辑：细胞培养周期长，需稳定无菌环境；正压可防止外部污染侵入，适配规模化培养需求。

3、阳性对照 / 病毒操作区：B 级 + 负压隔离

适用区域：阳性菌株培养、高致病性病毒载体操作、基因编辑阳性细胞验证间。

洁净等级要求：基础环境为B 级，但需维持相对周边区域 - 10~-15Pa 负压，独立排风经两级 HEPA 过滤；操作需在生物安全柜（BSL-2 级及以上）内进行。

匹配逻辑：负压强制气流单向流入，防止阳性污染物外泄；B 级背景保障实验操作的无菌性，兼顾安全与实验需求。

4、物料处理 / 更衣缓冲区：C 级～D 级

无菌物料暂存间：C 级（ISO 7 级），换气次数≥25 次 /h；

更衣 / 脱外包间：D 级（ISO 8 级），换气次数≥15 次 /h，与洁净区形成压差梯度（C 级＞D 级＞非洁净区）。

适用区域：物料脱外包、灭菌后暂存、一更 / 二更缓冲间。

5、洁净等级要求：

匹配逻辑：作为洁净区与非洁净区的过渡，降低污染带入风险；分级匹配物料清洁程度，避免过度净化造成浪费。

适用区域：废料灭菌、暂存、转运间。

洁净等级要求：D 级，维持相对核心区 -5~-8Pa 负压，独立排风经 HEPA 过滤；地面墙面需耐消毒、防渗漏。

匹配逻辑：负压防止废料气溶胶扩散，D 级满足基本清洁需求，无需高等级净化。

6、辅助功能区：非洁净级

适用区域：办公区、QC 检测区（非无菌项目）、冷库（非无菌物料）。

洁净等级要求：常规实验室环境，无需受控洁净等级，但需与洁净区物理隔断，通过缓冲间连通。

匹配逻辑：非无菌操作无需洁净环境，降低建设与运行成本。